“Bioline,siRNA转染试剂,假病毒包装,荧光定量PCR试剂,唾液DNA提取试剂”/

“Bioline,siRNA转染试剂,假病毒包装,荧光定量PCR试剂,唾液DNA提取试剂”/
公司新闻
当前位置:首页 > 关于我们 > 公司新闻 > 正文
荧光定量PCR,你了解多少?
发布者:百代生物  来源:  发布时间:2017-11-21

荧光定量PCR,你了解多少?例如,荧光定量检测方法如何选择?如果选择探针法进行荧光定量,探针如何选择?荧光定量实验的如果要做的成功,成功的因素有哪些?今天常州百代生物有限公司将会介绍荧光定量PCR的一些常规的知识,请大家接着往下看。

1.荧光定量PCR技术原理与应用?


技术原理:

实时荧光定量PCR,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,最终PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入平台期。将已知浓度的标准品梯度稀释进行Real Time PCR,按照起始DNA量由多到少的顺序等间隔得到一系列扩增曲线。Ct值与起始模板数的对数值之间存在线性关系,可以制作标准曲线。未知浓度的样品也得到Ct值,代入标准曲线,就可以求出未知样品的起始模板量。


应用进展:

Real Time PCR是具有划时代意义的技术,具有操作简单、快速方便、灵敏度高、重复性好、污染率低等优点,不仅应用于基因表达解析,还广泛应用于SNP分型解析、物种鉴定、病毒和病原菌的检测、转基因食品的定量分析、导入基因拷贝数的解析等诸多领域。 


2.荧光定量检测方法如何选择?


必须根据具体的实验用途进行选择。如果用于区别同源性高的序列以及进行SNP分型解析等多重PCR检测,荧光探针法无可替代,而进行除此之外的Real Time PCR实验,我们推荐使用简单易行、成本低的SYBR Green I荧光嵌合法。


3.探针法进行荧光定量,探针如何选择?


探针法通常是使用5’端带有荧光物质(如:FAM等),3’端带有淬灭物质(如:TAMRA、Eclipse、BHQ等)的探针进行荧光检测的方法。当探针完整时,5’端的荧光物质受到3’端的淬灭物质的制约,不能检出荧光。探针的报告基团的发射波长要在淬灭基团的吸收波长范围内。


4.绝对定量与相对定量有哪些差别?


绝对定量与相对定量有如下差别:

1. 绝对定量:是对未知样品的绝对量(拷贝数)进行测定的方法;通常应用于病毒、细菌、衣原体、支原体的定量检测及转基因食品的检测。 


2. 相对定量:是分别测定目的基因和参比基因的量,再求出对于参比基因的目的基因的相对量,最后再进行样品间相对量的比较。主要用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片、siRNA干扰的实验结果。



分享到:
常州百代生物科技股份有限公司 常州市戚墅堰东方东路51号新东方物流园 网站地图
电话:86-0519-88050392-607/606/635 监督电话:郝经理 18694947063 传真:0519-83382790 QQ:2728573193、2790565395、2257231185微信:18918859070
邮箱:czbdswkj@163.com 备案号:苏ICP备14052941号
在线客服在线客服
离线留言
在线业务咨询
王经理
座机:0519-88050392-607
qq2728573193
点击这里给我发消息
微信号18918859070
朱经理
座机:0519-88050392-635
qq2257231185
点击这里给我发消息
微信号18118014141
吴经理
座机:0519-88050392-606
qq2790565395
点击这里给我发消息
微信号18921004001
在线服务时间
周一至周五(工作日)
8:30-17:30
其他时间请联系微信