“Bioline,siRNA转染试剂,假病毒包装,荧光定量PCR试剂,唾液DNA提取试剂”/

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一组图文看懂荧光定量PCR
发布者:百代生物  来源:  发布时间:2017-11-30

关于荧光定量PCR,小编查阅了很多资料,然而对着一叠厚厚的资料却打了隔。But,凭着对PCR的无(被)限(逼)热(无)爱(奈),小编依然没有放弃,终于,功夫不负有心人,在思过崖上找到了PCR的“独孤九剑秘籍”,学了一招半式。在此分享给小伙伴们,望他日行走江湖时可以底气十足。



首先,介绍几个PCR相关术语。

扩增引物:人工合成的寡核苷酸序列,其序列与带扩增的目标DNA序列中的一段相同,用于引导DNA体外扩增。


扩增模板:DNA体外扩增中所用的待扩增的靶标序列。


CT值:实时荧光PCR反应中每个反应管荧光信号达到设定的阈值所经历的循环数。


荧光染料:可以和扩增产物结合而发出荧光的物质。


Taq酶:也叫DNA聚合酶,可以催化新DNA的合成。


溶解曲线:

使用染料法的时候,在PCR反应结束后,通过缓慢升温,并实时监测荧光值,所得到的曲线。用于分析PCR产物是否特异、PCR产物之间的碱基差异。


首先,具备相关的反应物是PCR反应的前提。


   




当反应启动之后,随着不同的温度及时间,反应步骤(过程)各有千秋。反应过程分为变性、退火和延伸三个阶段。



1.变性阶段是目标序列在解链。


2.退火阶段是引物(primers)和解开的DNA单链结合。

3.延伸阶段是在引物和聚合酶的引领下,反应利用体系的dNTPs合成新的DNA。

  

反应从变性到退火再到延伸称为一个循环,反应通常需要持续多个循环,产物产生的荧光才能被检测器检测,因此被检测到的阈值称之为CT值,最终得到的DNA数量原则上为2n次方。


据小编所知,在实际操作过程中,反应一般需要进行小时,也就是说,在短时间内,我们完全可以大量得到需要的目的DNA片段,然后用作下一步实验研究。荧光定量PCR目前已经广泛用于医疗。植物保护、动物检疫和食品安全等多个领域。这让小编体会到了科技的神奇,原来一个小小的反应管里隐藏这么多的信息。










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