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siRNA转染成功的主要关键点有什么?
发布者:百代生物  来源:  发布时间:2018-1-29

siRNA 在RNA沉寂通道中起中心作用,是对特定信使RNA(mRNA)进行降解的指导要素,细胞转染实验中经常会遇到siRNA转染,下面介绍一下siRNA转染成功的主要关键点。


               



1.设计合成有效的siRNA

RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要,最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉 默效果,减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是,需要同时设置阴性对照以排 除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有效性。


2.合成的siRNA注意纯度和工作浓度

siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA,siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件。


3.选择合适的siRNA转染试剂

选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对

siRNA实 验的影响非常大,可以直接影响实验结论和结果,所以一定选择低毒性的转染试剂,看一个转染试剂毒性是否低,有一个简单的方法,看转染的过程和要求,比如要 求的细胞密度越大,说明毒性越大,比如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短,说明毒性越大。除了低毒性,还最好操作简便,越简单越好,比如有的转染试剂要 求转染前换无血清培养基或低血清培养基,转染后又要有血清培养基,实际上,由于培养条件的频繁变化,可能会对细胞表达模式产生影响,对后续的mRNA和蛋 白分析也同样产生影响,最终影响实验的可靠性。


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