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RFectPM原代细胞小核酸转染试剂转染实验要点
发布者:百代生物  来源:  发布时间:2018-4-17

RFectPM原代细胞小核酸转染试剂是我公司美国研发团队在RFect细胞株小核酸转染试剂的基础上加以改进研发成功的专门用于原代细胞和悬浮细胞小核酸转染的试剂。RFectPM可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA,可转染绝大多数原代细胞和悬浮细胞。目前,无论国外还是国内,原代细胞、悬浮细胞的核酸转染都是个热点难题,市场还缺乏真正有效的商品化的原代细胞、悬浮细胞核酸转染试剂。RFectPM能够高效转染绝大多数原代细胞和悬浮细胞,获得比较理想的基因敲除效果。甚至对一些活体寄生虫幼虫,RFectPM也能获得较为理想的转染结果。对于大多数原代细胞,RFectPM的细胞转染阳性率都在80%以上,而转染细胞死亡率不到10%。RFectPM的使用也极其简便,先将sRNA与RFectPM室温混合,再将siRNA-RFectPM混合物直接加入含培养基的细胞,血清对转染效果没有影响,不必刻意添加或更换培养液。有关RFectPM原代细胞小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利,并通过PCT覆盖国际上多个国家和地区。

操作步骤:本说明书适用于24孔培养板的转染实验,其他规格的培养板的用量参照下面表格,表格给出的是每孔的用量与体积。

A. 细胞接种:转染前一天接种细胞,每孔 500 μl 培养基(不可加抗生素),使细胞在转染时密度在30-50% 。

B. siRNA-RFectPM混合物准备:

6pmol siRNA 用50μl无血清培养基稀释。

2μl RFectPM用50μl无血清培养基稀释。轻轻混匀,室温孵育5min。注意:确保在25 min内执行第三步操作,不要过于延迟。

孵育5min后,将siRNA 稀释液与RFectPM稀释液混合(总体积100μl)。轻轻混匀,室温孵育20 min。

C. 将混合物加到培养的细胞内(完全培养基培养):

将100μl混合物加入培养孔内,培养孔内含有0.5ml培养的细胞。轻轻晃动培养板,混匀。

37°C培养18-72h,检测基因抑制效果。如果需要,细胞培养4-6h时可以更换培养基,但不是必须。孵育时间的长短,取决于细胞类型、

所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。


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